سنتز بانک cdna گیاه arabidopsis و غربالگری با روش yeast two hybrid جهت یافتن یک میانکنش مولکولی با پروتئین msi4

کشف شبکه های اینتراکتوم کلیدی برای درک سیستم های زیستی و در نتیجه حیات است. از این رو تکنیک های زیادی برای ردیابی تعامل های مولکولی و مکانیسم های عملکردی و فیزیولوژیکی ابداع شده اند. تکنیک دوبل هیبرید مخمر هم روشی برای درک میانکنش های پروتئینی می باشد این تکنیک بر مکانیسم رونویسی استوار است. ما از این روش برای درک مکانیسمی که در گذر از مرحله رویشی به زایشی دخالت دارد استفاده کردیم. آغاز گلدهی در گیاهان توسط مکانیسم های مختلفی مثل دوره نوری، دوره سرما، هورمون ها و اپی ژنتیک کنترل می شود. مسیری مهم در این فرایند کنترل ژن flc است که به طور اپی ژنتیک در مهار گلدهی اثر دارد. msi4 پروتئینی است که به واسطه آن داستیلاسیون هیستون های ژن flc اتفاق می افتد، بنابراین بیان آن را متوقف کرده و به این ترتیب مهار از روی عوامل پیش برنده گلدهی برداشته می شود و گلدهی آغاز می شود. برای شناخت این مکانیسم ابتدا یک بانک cdna به روشی نوین برای اولین بار در ایران ساخته شد و پس از قرار دادن cdna و ژن msi4 در وکتورهای مناسب، msi4 به عنوان طعمه استفاده شد و بانک cdna به روش y2h غربال گردید تا پروتئین میانکنشگر با msi4 را صید کند. پروتئینی که به دام افتاد، pkt3 نام دارد که یک استیل کوآسیل ترانسفراز است. وظیفه این پروتئین آزاد کردن و انتقال بنیان های استیل به مولکولها است از این رو در بسیاری از فرآیند های حیاتی سلول ها نقش دارد. این میانکنش به وسیله کلونینگ cdna کامل pkt3 نیز، تایید شد. میانکنش msi4-pkt3 برای اولین بار در دنیا گزارش می شود و افق های روشنی را برای مطالعات بیشتر در مورد مکانیسم عمل msi4 که مطالعات محدودی روی آن انجام شده است، پیش روی ما قرار می دهد. از این دستاورد می توان برای تنظیم زمان گلدهی و تولید محصولات زراعی استفاده کرد.